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反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量
时间:2012-12-24 浏览次数:887次 无忧论文网
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竺黄复方片由甘草、力嘎都、牛黄、红花、榜嘎(唐古特乌头)等九味药材组成,具有利肺、消炎、止痛的功效,用于小儿流感引起的肺炎、上呼吸道感染等[1]。该方标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册,标准未收载鉴别项和含量测定项,不利于生产和使用的相关部门控制其药品质量。本文拟建立甘草酸含量测定方法,增加含量测定项,提高其质量标准。   1 材料 Waters2695/2690分离系统,2996(2487)检测器,Empower色谱管理系统,岛津UV-2100型紫外分光光度计,Atuto Science AS5150超声波清洗仪,Sartorius公司BP211D电子天平。甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。   2 方法与结果   2.1 甘草酸的含量测定   2.1.1 色谱条件和系统适用性实验用kromasil色谱柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.2 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸(65∶35∶1),流速1 ml·min-1,柱温:30 ℃,检测波长250 nm[2],按甘草酸铵峰计,色谱柱理论塔板数不低于2000,甘草酸铵峰与其它峰达到基线分离,峰形对称,色谱图见图1。   2.1.2 溶液的制备对照品溶液的制备:精密称取甘草酸铵对照品适量,置10 ml量瓶中,加甲醇-0.2 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸(65∶35∶1)溶解并稀释至刻度,摇匀,使成为每毫升中含对照品0.201 mg的溶液即得。 样品溶液的制备:取竺黄复方片适量,研细,取1.5 g,精密称定,置100 ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-0.2 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸(65∶35∶1)溶液45 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液,用0.45 μm滤膜滤过即得。 阴性样品溶液的制备:取缺甘草的阴性样品,照上述样品溶液制备方法处理即得阴性样品溶液。 2.2 方法学考察   2.2.1 线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液2,4,6,8,10 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积,并以峰面积A为纵坐标,进样量C(μg)为横坐标,进行回归,得回归方程:A= 673 028.287 8C - 67 302.707 6,甘草酸铵在0.402~2.010 μg之间,进样量与峰面积线性关系良好(r=0.999 8)。   2.2.2 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl,连续进样5次,甘草酸铵峰面积的RSD为0.97%,表明仪器精密度良好。 2.2.3 重复性实验取竺黄复方片品(批号20040301)研细,取1.5 g,5份,精密称定,置100 ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-0.2 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸(65∶35∶1)溶液45 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件测定,记录色谱图,并计算含量,结果甘草酸含量(以甘草酸铵计)平均含量为2.75 mg·g-1,RSD为1.81%。上述实验表明,该方法的精密度较好。   2.2.4 稳定性实验取样品供试液(批号20040301)与甘草酸铵对照品分别于0,2,4,6,8 h,分别进样10 μl注入色谱仪,记录峰面积,平均峰面积为533 271 ,RSD为1.97 %,说明样品溶液8 h内稳定。   2.2.5 加样回收率实验精密量取甘草酸铵对照品溶液(0.2010 mg/ml)10 ml,5份,分别置100 ml具塞锥形瓶中,水浴上挥干甲醇,取已知含量的样品(批号20040301)约0.8 g,5份,精密称定,置上述锥形瓶中,加入甲醇-0.2 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸(65∶35∶1)溶液45 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,称定重量,用上述溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过,取上清液,用0.45 μm过滤膜过滤,作为供试品溶液。按上述色谱条件,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,并计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果(略)   2.2.6 专属性考察精密吸取阴性样品溶液10 μl,注入色谱仪,结果表明干草酸铵位置上无干扰峰。   2.2.7 样品测定样品按2.1.2项下方法制备样品溶液后,再按上述重复性试验项下方法测定含量。3批样品中甘草酸铵含量分别为1.034,1.103和1.008 mg/片。   3 讨论 在甘草酸的含量测定中,提取溶媒比较了甲醇提取和流动相提取,结果表明用流动相提取效果更佳。 本实验用RP–HPLC法测定竺黄复方片中甘草酸的含量,所建方法简便、准确、重复性好,可用于竺黄复方片的质量控制。
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